TRIM29通过CYTOR抑制miR
【摘要】： 目的:甲状腺癌是最常见的内分泌肿瘤,约占所有恶性肿瘤的1%。甲状腺癌的病理类型包括乳头状癌、滤泡状癌、未分化癌和髓样癌。其中乳头状癌最常见,恶性程度低,预后好。甲状腺癌的发病率与年龄、性别和地区有关。近年来,甲状腺癌的发病率呈上升趋势,颈淋巴结转移趋势明显。晚期或复发转移性疾病患者的治疗选择有限,导致预后不良。因此,研究甲状腺乳头状癌发生、发展的分子机制对于寻找新的治疗方案和靶点具有重要意义。TRIM29与FN1:TRIM29在各种肿瘤中均失调,起促癌或抑癌作用。在这项研究中,我们发现TRIM29和纤连蛋白1(FN1)在PTC组织中均表达增加。TRIM29过表达或下调都不会显著改变PTC细胞的增殖。TRIM29过表达显著促进,而TRIM29敲低则通过调节PTC细胞中的FN1表达来显著降低迁移和侵袭。我们发现TRIM29通过调节mi R-873-5p表达改变了FN1 m RNA的稳定性。本项研究还证明,长链非编码RNA(Lnc RNA)CYTOR通过与premi R-873相互作用抑制mi R-873-5p的成熟,而TRIM29通过对CYTOR上调作用降低mi R-873-5p的表达。这项研究有助于我们对PTC转移的潜在机制进一步理解,并提示TRIM29可能作为一种新的治疗靶点,为抑制PTC专业提供了潜在干预策略。研究方法:1、使用Western blot对三种甲状腺癌细胞系中TRIM29基础表达量进行分析,构建TRIM29稳定细胞系,随后进行细胞计数和Transwell实验分别解析TRIM29对甲状腺癌细胞增殖能力和迁移侵袭能力的影响。2、使用Western blot实验分析细胞中TRIM29对FN1的影响以及组织中二者表达的相关性,并构建FN1过表达或敲低的稳定细胞系解析FN1对细胞增殖和迁移侵袭能力的影响。3、使用实时RT-PCR分析TRIM29对FN1 m RNA合成过程的影响并利用Western blot实验及RIP实验分析TRIM29对Ago2蛋白表达及其募集到FN1 m RNA情况的影响。4、通过在线数据库(starbase.sysu.edu.cn),分析TRIM29与has-mi R-873-5p在乳头状癌组织中的共表达情况,利用mi R-873-5p antagomir和mi R-873-5p mimic处理TRIM29稳转IHH4和TPC1细胞系,用Western blot验证FN1是否受到影响,及其对细胞迁移侵袭的影响。5、使用实时RT-PCR分析TRIM29稳转细胞系中primi R-873、premi RNA-873以及mi R-873-3p的表达水平,并检测稳转TRIM29细胞系中的TRBP、Dicer的表达情况。6、根据在线数据库(starbase.sysu.edu.cn)分析CYTOR与TRIM29、FN1的相关性及TRIM29m RNA和lnc RNA CYTOR之间的相关性。7、使用免疫荧光和FISH染色分别解析TRIM29和lnc RNA CYTOR在IHH4细胞中的分布情况。8、敲低或过表达CYTOR通过Western blot解析FN1蛋白表达的变化,并进一步解析其对迁移侵袭的影响。9、根据Lnc Tar在线软件预测premi R-873和CYTOR之间潜在的结合位点,并确认它们的相互作用。10、通过q RT-PCR分析敲低CYTOR对过表达TRIM29细胞中premi R-873,mi R-873-5p和mi R-873-3p表达的影响。11、根据在线数据库(starbase.sysu.edu.cn)分析CYTOR与hsa-mi R-873-5P,hsa-mi R-873-3P在乳头状甲状腺癌组织中的共表达情况。结果:1、TRIM29显著促进甲状腺乳头状癌(PTC)细胞的迁移和侵袭能力,但不影响PTC细胞的增殖能力。2、TRIM29与FN1呈正相关,并通过调节FN1促进PTC细胞的迁移和侵袭能力。3、TRIM29不会影响FN1 m RNA的从头合成,但会通过Ago2依赖性机制增强FN1 m RNA的稳定性。4、在PTC细胞中TRIM29通过mi R-873-5p增强FN1表达。5、TRIM29通过抑制Dicer和TRBP募集来抑制premi R-873裂解。6、Lnc RNA CYTOR参与TRIM29对FN1的促进调控。7、TRIM29通过CYTOR的上调抑制premi R-873裂解以生成成熟的mi RNA。结论:TRIM29通过上调Lnc RNA CYTOR抑制premi R-873的切割进而抑制mi R-873-5P生物合成,从而上调FN1表达并促进甲状腺乳头状癌细胞的迁移和侵袭。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2021
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