油酰乙醇胺对脂肪肝细胞模型的作用及机制

油酰乙醇胺对脂肪肝细胞模型的作用及机制

【摘要】：目的:在脂肪肝细胞模型建立的基础上,首次探讨油酰乙醇胺(oleoylethanolamide OEA)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)体外细胞模型的作用及可能机制。方法:以HepG2细胞为研究对象,给予不同浓度的医用静脉滴注脂肪乳剂(MFE)和10%胎牛血清的低糖DMEM培养基培养HepG2细胞24小时,通过MTT法测定细胞活性,结合油红O染色及细胞内甘油三酯的测定,确定NAFLD体外模型的建立。模型确立后给予OEA及阳性对照药非诺贝特6、12、24小时。药物干预结束,提取细胞总RNA,并反转录,通过实时定量PCR检测脂代谢及脂肪肝相关炎症基因的表达,同时检测细胞内甘油三酯(TG)含量,及油红O染色观察细胞内脂滴蓄积情况。结果: (1)通过油红O染色、TG的测定及结合MTT结果显示:稀释20倍MFE对细胞活性无显著影响,且细胞内TG显著升高,细胞内脂滴蓄积明显,是诱导细胞脂肪变性的最佳浓度。(2)TG含量测定:OEA 12小时处理组与模型组细胞内TG含量显著下降(P<0.001)。(3)油红O染色结果显示:OEA 10μM、50μM、12小时,可不同程度降低细胞内蓄积的脂滴,尤其50μM效果明显。(4)实时定量PCR结果显示:与模型组相比50μM OEA处理12小时后脂代谢基因PPAR-α、Sirt-1表达明显升高(P<0.05);OEA组较模型组脂肪酸β氧化限速酶CPT-1表达也显著增高(P<0.05);而NAFLD的标志性基因SREBP-1c,OEA组较模型组表达显著降低(P<0.001),与NAFLD密切相关的炎症因子TNF-а在OEA治疗组的表达显著降低(P<0.001),差异有统计学意义。结论:1%MFE培养HepG2细胞24小时,可诱导细胞脂肪变,可作为脂肪肝细胞模型;OEA通过激活脂代谢基因PPAR-α、Sirt-1、CPT-1的mRNA表达,下调SREBP-1c及炎症基因TNF-а的表达,从而缓解HepG2细胞脂肪变,减少细胞内脂滴,因此OEA对脂肪肝细胞模型有一定缓解作用。在OEA治疗中PPAR-α、Sirt-1表达趋势一致,推测两者为上下游关系。

【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010

1 王炳芳;脂肪肝细胞模型的建立及其生物学特性[A];中国中西医结合第十九次全国消化病学术会议暨国家级中西医结合消化疾病新进展学习班论文汇编[C];2007年 2 柯蕴慧;趙珊;翁林仲;成年人體脂肪率與身體質量指數、血脂肪及脂肪肝相關性的探討[A];膳食变迁对民众健康的影响：挑战与应对——第二届两岸四地营养改善学术会议学术报告及论文摘要汇编[C];2010年 3 熊锋莉;黄晓光;脂肪[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年

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